的干燥全草,别名金钱草、铜钱沙、广金钱草等,主产于广东、广西、海南和云南等地,具有平肝火、清湿热、利尿通淋的功效,现代常用于治疗肾炎浮肿、尿路感染、尿路结石、胆囊结石、黄疸肝炎、小儿疳积等。其主要化学成分为黄酮类和酚酸类,此外还有生物碱,萜类,多糖等,其质量分析主要以黄酮苷类成分为对照品进行定量分析研究。现代药理研究表明广金钱草具有利胆利尿、抗结石、抗炎、抗氧化等多方面的药理活性。为进一步明确广金钱草中治疗尿路结石、尿路感染、前列腺炎等方面疾病的有效成分,本研究对其进行系统的化学成分研究,从广金钱草醇提取物分离得到5,7-dihydroxy-2 -methoxy- 3 ,4 -methylenedioxyisoflavanone5,7-dihydroxy-2 ,4 - dimethoxyisoflavanone5,7,3 -trihydroxy- 4 ,5 -dimethoxyisoflavone5,7-dihydroxy-3 ,4 -dimethoxyflavone7,3 - dihydroxy-4 ,5 -dimethoxyisoflavone
Bruker Avance III 600型核磁共振仪(以TMS为内标,德国Bruker公司);Thermo vanquish高效液相色谱仪(美国Thermo公司);岛津LC-10A制备液相色谱仪(日本shimadzu公司);柱色谱硅胶粉(100~200、200~300目)和硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂);MCI精细分离树脂(日本三菱化工);大孔吸附树脂D101(日本三菱化工);凝胶Sephadex LH-20填料(GE Pharmacia公司);质谱所用试剂为质谱级纯,分析和制备型高效液相色谱所用试剂为色谱纯,其他均为分析纯。
干燥的广金钱草全草药材50 kg,切小段后粉碎,加10~15倍量的75%乙醇浸提2次,每次5~7 d,合并2次浸提滤液,减压回收溶剂得到醇提取物浓缩液(20 L),约为3.77 kg。醇提取物浓缩液依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取(10 L×3次),各萃取部位合并浓缩,分别得到石油醚层(JQCS,215.6 g)、醋酸乙酯层(JQCY,237.7 g)、正丁醇层(JQCZ,980 g)和水相部位(JQCW,2.23 kg)。
取JQCY 210 g溶解后上MCI HP20树脂柱去除色素,依次用水和85%、100%甲醇洗脱,收集85%甲醇洗脱部位,减压浓缩回收溶剂,得浸膏190 g。称取等量硅胶粉拌样后上硅胶柱,采用石油醚-丙酮(100∶0→1∶1)梯度洗脱,然后更换为氯仿-甲醇(10∶1→0∶1)梯度洗脱,根据TLC合并为Fr. Y1~12共12个馏份,并依次开展分离。
本研究采用多种色谱分离技术及天然产物结构鉴定方法,从广金钱草全草的醇提取物中分离得到31个黄酮类成分,其中黄酮及黄酮苷类14个、异黄酮及异黄酮苷类9个、二氢黄酮1个、二氢异黄酮5个及黄酮衍生物2个,基本涵盖了广金钱草中含有的黄酮类成分的结构类型。其中,二氢异黄酮类成分是广金钱草中较晚发现的结构类型,由Zhao等[36]于2007年首次发现8个化合物,随后几乎未再有关于从广金钱草中分离得到二氢异黄酮的报道。本研究分离得到的5个二氢异黄酮中有2个为首次从广金钱草中分离得到,进一步丰富了广金钱草中二氢异黄酮的种类。
广金钱草作为排石之要药,其临床作用已得到不断验证,但其排石的作用机制尚不明确。广金钱草富含黄酮,且种类繁多,近期研究表明,广金钱草中的黄酮类化合物与其治疗泌尿系统疾病的传统药效息息相关。解海杰等[37]建立体外泌尿系统结石细胞模型,验证了广金钱草总黄酮可以通过阻断p38/MAPK通路抑制肾小管上皮细胞的过度自噬和凋亡,减少肾小管上皮细胞的损伤,从而抑制泌尿系结石的形成。Zhou等[38]利用大鼠尿石症动物模型开展研究,结果表明广金钱草总黄酮可能通过抗氧化、抗炎、碱化尿液等方面的作用,抑制大鼠泌尿系结石的形成。上述广金钱草中的黄酮类成分,如化合物染料木素(11)和大豆苷元(17)通过抗炎作用和调节前列腺细胞的锌转运表达,表现出预防前列腺增生的作用[39]。山柰酚(15)能够通过诱导细胞周期阻滞,进而诱导前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞的增长,表现出良好的体外抗前列腺癌作用;利用前列腺癌斑马鱼异种移植瘤模型进一步研究发现,山柰酚可以有效抑制斑马鱼体内肿瘤的生长,表现出良好的体内抗前列腺癌作用[40]。碳苷黄酮如异荭草苷(28)和异牡荆苷(30)对常见泌尿系统致病菌、大鼠前列腺炎模型、幼年小鼠前列腺生长,以及对丙酸睾丸素诱导的小鼠前列腺增生均有明显抑制作用,表现出抗前列腺炎和抗前列腺增生的作用[41]。还有研究表明化合物维采宁-2(31)可抑制前列腺癌的生长并增加广泛抗肿瘤药物Taxotere体外和体内的抗肿瘤活性,二者的组合,可由于其多靶点抗肿瘤潜力,可能在治疗晚期和转移性前列腺癌方面非常有效[42]。此外,大多数黄酮类化合物均具有显著抗炎、抗氧化和抗菌作用,对于广金钱草的药效作用均有不可忽视的贡献。综上所述,从广金钱草中分离得到的黄酮类成分对于揭示广金钱草治疗尿路结石、尿路感染,前列腺炎、前列腺增生等方面疾病的药效物质基础具有重要参考意义。